Το ρυθμιστικό Tris είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο ρυθμιστικό pH που χρησιμοποιείται ευρέως σε πειράματα βιοχημείας. Στις αντιδράσεις PCR, το ρυθμιστικό διάλυμα Tris αναστέλλει τη δραστηριότητα της DNase επιπλέον της διατήρησης της σταθερότητας του pH. Ο μηχανισμός δράσης του εκδηλώνεται κυρίως στις ακόλουθες πτυχές:
1. Αλλαγή της ενεργού διαμόρφωσης της DNase: Το κατιόν στο ρυθμιστικό διάλυμα Tris μπορεί να συνδεθεί στην ενεργή θέση της DNase, αλλάζοντας τη διαμόρφωση της, μειώνοντας έτσι τη δραστηριότητά του. Αυτός ο τρόπος δράσης αναστέλλει τη δραστηριότητα των νουκλεασών που υπάρχουν στο περιβάλλον, προστατεύοντας το πρότυπο DNA από την αποικοδόμηση.
2. Ανταγωνιστική αναστολή: Τα κατιόντα στο Tris μπορούν να συνδεθούν ανταγωνιστικά στο εκμαγείο DNA με το ενεργό κέντρο της DNase, αποτρέποντας έτσι τη σύνδεση της DNase στο εκμαγείο και μειώνοντας τη δραστηριότητα αποικοδόμησής της. Αυτή η ανταγωνιστική αναστολή μπορεί να μειώσει τη δραστηριότητα της DNase που προκαλείται από ακαθαρσίες στο σύστημα αντίδρασης.
3. Αυξήστε τη θερμοκρασία αντίδρασης: Το ρυθμιστικό διάλυμα Tris έχει καλή σταθερότητα σε υψηλές θερμοκρασίες, επομένως μπορεί να αυξήσει τη θερμοκρασία της αντίδρασης PCR. Η υψηλή θερμοκρασία μπορεί να αναστείλει περαιτέρω τη δραστηριότητα της DNase και να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα ενίσχυσης της DNA πολυμεράσης. Συνδυάζοντας υψηλές θερμοκρασίες με ρυθμιστικό Tris, τα αποτελέσματα της DNase μπορούν να εξαλειφθούν και να ληφθεί ένα καθαρότερο προϊόν PCR.
